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龍圖騰網(wǎng)恭喜南京啟真基因工程有限公司申請(qǐng)的專利構(gòu)建CRYGC基因突變的先天性白內(nèi)障模型豬核移植供體細(xì)胞的基因編輯系統(tǒng)及其應(yīng)用獲國(guó)家發(fā)明授權(quán)專利權(quán)，本發(fā)明授權(quán)專利權(quán)由國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局授予，授權(quán)公告號(hào)為：CN115232836B 。

龍圖騰網(wǎng)通過國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局官網(wǎng)在2025-05-06發(fā)布的發(fā)明授權(quán)授權(quán)公告中獲悉：該發(fā)明授權(quán)的專利申請(qǐng)?zhí)?專利號(hào)為：202110945790.0，技術(shù)領(lǐng)域涉及：C12N15/87；該發(fā)明授權(quán)構(gòu)建CRYGC基因突變的先天性白內(nèi)障模型豬核移植供體細(xì)胞的基因編輯系統(tǒng)及其應(yīng)用是由牛冬;汪滔;陶裴裴;劉璐;曾為俊;王磊;程銳;趙澤英;馬翔;黃彩云;段星設(shè)計(jì)研發(fā)完成，并于2021-08-17向國(guó)家知識(shí)產(chǎn)權(quán)局提交的專利申請(qǐng)。

本構(gòu)建CRYGC基因突變的先天性白內(nèi)障模型豬核移植供體細(xì)胞的基因編輯系統(tǒng)及其應(yīng)用在說明書摘要公布了：本發(fā)明公開了構(gòu)建CRYGC基因突變的先天性白內(nèi)障模型豬核移植供體細(xì)胞的基因編輯系統(tǒng)及其應(yīng)用。本發(fā)明提供了一種制備重組細(xì)胞的方法，包括如下步驟：將SEQIDNO：18所示CRYGC?gRNA1、SEQIDNO：19所示CRYGC?gRNA4和NCN蛋白共轉(zhuǎn)染豬細(xì)胞，得到重組細(xì)胞。本發(fā)明采用CRISPRCas9技術(shù)聯(lián)合雙gRNA編輯進(jìn)行了CRYGC基因的敲除，模擬白內(nèi)障的自然發(fā)病遺傳特征，并獲得了CRYGC基因敲除的單細(xì)胞克隆，為后期通過體細(xì)胞核移植動(dòng)物克隆技術(shù)培育白內(nèi)障模型豬奠定了基礎(chǔ)。本發(fā)明對(duì)于白內(nèi)障藥物的研發(fā)及揭示該病的發(fā)病機(jī)制具有重大應(yīng)用價(jià)值。

本發(fā)明授權(quán)構(gòu)建CRYGC基因突變的先天性白內(nèi)障模型豬核移植供體細(xì)胞的基因編輯系統(tǒng)及其應(yīng)用在權(quán)利要求書中公布了：1.一種制備重組細(xì)胞的方法，包括如下步驟：將CRYGC-gRNA1、CRYGC-gRNA4和NCN蛋白共轉(zhuǎn)染豬細(xì)胞，得到重組細(xì)胞；所述CRYGC-gRNA1為sgRNA，其靶序列結(jié)合區(qū)如SEQIDNO：18中第3-22位核苷酸所示；所述CRYGC-gRNA4為sgRNA，其靶序列結(jié)合區(qū)如SEQIDNO：19中第3-22位核苷酸所示；所述NCN蛋白如SEQIDNO：3所示；所述NCN蛋白的制備方法包括如下步驟：1將質(zhì)粒pKG-GE4導(dǎo)入大腸桿菌BL21DE3，得到重組菌；2采用液體培養(yǎng)基30℃培養(yǎng)所述重組菌，然后加入IPTG并25℃誘導(dǎo)培養(yǎng)，然后收集菌體；3將收集的菌體進(jìn)行菌體破碎，收集粗蛋白溶液；4采用親和層析從所述粗蛋白溶液中純化具有His6標(biāo)簽的融合蛋白；5采用具有His6標(biāo)簽的腸激酶酶切具有His6標(biāo)簽的融合蛋白，然后采用Ni-NTA樹脂去除具有His6標(biāo)簽的蛋白，得到純化的NCN蛋白；質(zhì)粒pKG-GE4如SEQIDNO：1所示。

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